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    對于超低lgG胎牛血清的詳解

    更新時間:2025-09-04  |  點擊率:129

      這是一個在特定生命科學研究領域中非常重要的專用試劑。我們將從定義、為何需要它、如何生產、關鍵應用、如何選擇以及注意事項等多個角度進行解析。

      一、 什么是超低IgG胎牛血清?

      它是胎牛血清 的一個特殊級別,其核心特征是免疫球蛋白G(IgG)的含量被極大地降低,通常遠低于標準級別的胎牛血清。

           名稱                貨號         規格    儲存條件

      超低 IgG 胎牛血清   FBS-SG500    500ml   -20°C

      胎牛血清(FBS):是從母牛剖腹取出的胎牛心臟中穿刺獲取的血液,經自然凝結、離心后去除血細胞、纖維蛋白等成分后得到的淡黃色上清液體。它是細胞培養中常用、有效的天然培養基添加劑,提供細胞生長所必需的生長因子、激素、營養物質和附著因子。

      免疫球蛋白G(IgG):是血清中最主要的一類抗體,是動物機體免疫應答的重要組成部分。但在細胞培養的某些應用中,它會成為嚴重的干擾因素。

      “超低"通常沒有一個全球統一的絕對值標準,但主流供應商提供的產品其IgG濃度一般低于5 μg/mL,有些甚至可低于1-2 μg/mL。而普通FBS的IgG含量通常在100-500 μg/mL范圍。

      二、 為什么需要去除IgG?——核心原因

      在大多數常規細胞培養中,標準FBS中的IgG不會造成問題。但在以下兩類關鍵應用中,IgG的存在會帶來嚴重干擾:

      免疫學實驗的干擾(最主要原因)

      抗體相關實驗:如免疫沉淀(IP)、共免疫沉淀(Co-IP)、Western Blot、免疫熒光(IF)、流式細胞術 等。這些實驗都需要使用抗體(通常也是IgG)來特異性識別靶蛋白。

      問題所在:血清中殘留的牛IgG可能會與實驗中加入的抗體發生交叉反應。

      與二抗反應:實驗中使用的抗體制備的二抗(如兔抗小鼠IgG)無法區分小鼠IgG和牛IgG,會非特異性地結合到牛IgG上,導致背景信號高,條帶模糊,結果無法解讀(例如WB中出現多條非特異條帶或高背景)。

      與Protein A/G/A-L 珠子反應:IP/Co-IP實驗中使用Protein A或G珠子來吸附抗體-抗原復合物。Protein A/G對多種物種的IgG的Fc段都有高親和力,同樣會強烈地、非特異性地吸附血清中的牛IgG,不僅增加背景,還會競爭性消耗珠子結合位點,降低目標蛋白的捕獲效率。

      某些特殊細胞培養的需求

      在培養一些本身會分泌IgG的細胞時(如雜交瘤細胞、B淋巴細胞),外源性的牛IgG會干擾對細胞自身分泌IgG的定量和分析。

      在研究細胞自身免疫應答或信號通路時,外源IgG可能作為一種非特異性刺激物,激活某些細胞表面的Fc受體,從而干擾實驗結果。

      三、 如何生產出超低IgG血清?——主要工藝

      降低血清中IgG含量的核心技術是色譜純化技術,最常見的是:

      親和色譜:使用Protein G 或 Protein A 瓊脂糖凝膠作為色譜柱填料。Protein G/A對IgG的Fc段具有高的特異性和親和力。當血清流經色譜柱時,IgG被特異性捕獲并留在柱子上,而其他血清成分(生長因子、激素等)則流過并被收集起來。最終收集到的流出液就是IgG含量極低的血清。

      其他方法:也可能結合離子交換色譜或其他物理化學方法進行進一步純化。

      重要提示:這個純化過程在去除IgG的同時,不可避免地也會損失一部分其他有價值的成分,尤其是某些與IgG結合或性質相似的生長因子和蛋白。因此,超低IgG血清在支持細胞生長方面可能略遜于未經處理的頂級標準FBS。供應商會努力優化工藝以最大限度地保留生長支持能力。

      四、 主要應用領域

      蛋白質相互作用研究:Co-IP 和 IP 實驗的血清,能顯著降低非特異性結合,提高信噪比。

      蛋白質免疫印跡:特別是當檢測的蛋白分子量與IgG重鏈(~55 kDa)或輕鏈(~25 kDa)接近時,使用超低IgG血清可避免來自血清IgG的干擾條帶,使結果清晰可靠。

      流式細胞術:用于細胞表面或胞內抗原的檢測,能降低非特異性熒光背景,使細胞群分群更清晰。

      免疫細胞化學/免疫熒光(ICC/IF):減少背景染色,提高成像質量。

      雜交瘤細胞培養與抗體生產:便于準確測定雜交瘤細胞自身產生的單克隆抗體,避免牛IgG的污染。

      病毒學研究:某些病毒培養和中和實驗中也需避免抗體干擾。

      五、 如何選購和使用?

      確認必要性:并非所有細胞培養都需要。只有在進行上述免疫學實驗或培養特殊細胞時才有必要使用。常規細胞傳代擴增使用標準FBS更經濟。

      關注關鍵指標:

      IgG濃度:要求供應商提供CoA(分析證書),確認其IgG含量確實達到“超低"水平(如<5 μg/mL)。

      細胞生長性能測試:通過查閱CoA,了解該批血清對常見細胞系(如CHO、HeLa、Vero、MSC等)的生長支持效率(倍增時間、飽和密度等),確保其能滿足你的細胞生長需求。

      內毒素含量:內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁成分,對細胞有毒性。超低IgG血清的內毒素水平也應較低(如<10 EU/mL)。

      進行測試:在大規模使用前,務必先用你的特定細胞系和實驗方法進行測試,驗證其生長性能和降低背景的效果。

      注意兼容性:確保實驗中所用的抗體(一抗和二抗) 不會與可能殘留的微量牛IgG發生交叉反應。例如,如果你的二抗是“抗牛IgG",那么顯然不能使用任何胎牛血清。


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      注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒

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