ELISA實驗操作：有了這些技巧，ELISA加樣您還覺得難嗎

　　以下是ELISA實驗加樣環節的關鍵技巧與注意事項，結合操作細節與常見問題整理：

　　一、加樣前的準備?

　　試劑平衡?

　　所有試劑(包括標準品、樣本、酶標試劑)需提前30分鐘從冰箱取出，室溫平衡至避免溫度差異影響反應動力學?。

　　標準品溶解后需靜置10-30分鐘，避免未溶解的蛋白被槍頭帶出導致濃度誤差?。

　　耗材校準?

　　移液槍需定期校準，選擇密封性好的槍頭(如低吸附款)，避免液體殘留或漏液?。

　　二、加樣操作技巧?

　　加樣手法?

　　垂直懸空加樣?：槍頭距孔底1-2mm，避免貼壁或產生氣泡(氣泡會導致顯色不均)?。

　　排槍操作?：使用排槍加樣時，確保每孔加樣量一致(如50μL)，換樣品時更換槍頭防止交叉污染?。

　　順序控制?

　　標準品與樣本建議設置雙復孔，加樣順序需一致(如從左到右)，避免因操作延遲導致孵育時間差異?。

　　三、常見問題與解決方案?

　　問題? ?原因? ?解決方案?

　　邊緣孔顯色過深 加樣時液體濺到孔壁 垂直懸空加樣，避免貼壁?

　　平行孔OD值差異>10% 加樣量不準或孵育溫度波動 校準移液槍，使用恒溫箱孵育?

　　假陽性(空白孔顯色) 試劑污染或洗板不凈 新鮮配制洗滌液，拍干時垂直用力?

　　四、進階技巧?

　　震蕩孵育?：加樣后輕晃酶標板(2-3次)可加速抗原抗體結合，提高反應效率?。

　　自動化兼容?：機械臂操作時需選擇適配的封板膜(如壓力膜)，避免加樣后蒸發?。

　　通過規范操作與細節控制，可顯著提升ELISA實驗的重復性與準確性。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒

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