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    影響ELISA重復(fù)性的常見原因及解決方案

    更新時間:2025-10-16  |  點擊率:603
      影響ELISA重復(fù)性的常見原因及解決方案
     
      1. ‌操作不一致性‌
     
      加樣誤差‌:移液器未校準(zhǔn)、吸頭松動或加樣速度不均會導(dǎo)致孔間差異‌。
     
      溫育與洗滌條件‌:孵育時間、溫度或洗滌次數(shù)不一致(如靜置時間不足15秒)直接影響信號穩(wěn)定性‌。
     
      人員差異‌:不同操作者的手法(如拍干力度)可能引入批間變異‌。
     
      2. ‌樣本處理問題‌
     
      樣本不均一‌:未充分混勻或移液位置不一致導(dǎo)致濃度差異‌。
     
      溶血/污染‌:溶血樣本中的血紅蛋白干擾顯色,或樣本中殘留纖維蛋白形成假陽性。
     
      3. ‌試劑與設(shè)備因素‌
     
      封閉不充分‌:未阻斷非特異性結(jié)合位點,導(dǎo)致背景信號波動‌。
     
      酶標(biāo)板損傷‌:洗板或加樣時劃傷包被表面,影響抗體結(jié)合效率‌。
     
      邊緣效應(yīng)‌:外周孔因蒸發(fā)或溫度差異導(dǎo)致顯色不均‌。
     
      4. ‌環(huán)境與質(zhì)量控制‌
     
      交叉污染‌:重復(fù)使用封板膜或吸頭導(dǎo)致孔間污染‌。
     
      儀器校準(zhǔn)‌:酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置錯誤或波長選擇不當(dāng)影響讀數(shù)一致性。
     
      優(yōu)化建議
     
      標(biāo)準(zhǔn)化操作‌:固定溫育時間(如37℃±1℃)、使用同一批試劑盒‌。
     
      質(zhì)控樣本‌:每板加入陽性/陰性對照,監(jiān)控批內(nèi)CV值(目標(biāo)<10%)‌。
     
      通過嚴(yán)格規(guī)范操作流程、優(yōu)化樣本處理及定期校準(zhǔn)設(shè)備,可顯著提升ELISA重復(fù)性‌。
     
      注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
     
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