如何避免ELISA實(shí)驗(yàn)中的樣本污染?
在ELISA實(shí)驗(yàn)中避免樣本污染需從樣本處理、操作規(guī)范及環(huán)境控制三方面綜合防控:
一、樣本處理規(guī)范
避免溶血與細(xì)菌污染?
溶血樣本中的血紅蛋白具有類過氧化物酶活性,易導(dǎo)致假陽性;細(xì)菌污染可能降解酶標(biāo)物或產(chǎn)生干擾酶?。建議采集后立即離心分離血清,避免反復(fù)凍融破壞蛋白結(jié)構(gòu)?。
樣本保存與稀釋?
短期保存需2-8℃,長期應(yīng)-70℃以下,使用前室溫平衡30分鐘?。稀釋時(shí)需使用同一移液器和槍頭,避免交叉污染?。
二、操作流程控制
分區(qū)操作與耗材管理?
嚴(yán)格劃分樣本制備區(qū)、加樣區(qū)、孵育區(qū),使用物理屏障隔離?。酶標(biāo)物需分裝保存,避免反復(fù)開瓶污染?。
加樣與洗滌規(guī)范?
加樣需垂直操作,避免液體飛濺;每份樣本更換槍頭,定期校準(zhǔn)移液器?。洗滌時(shí)確保洗液注滿孔位,拍板力度適中,避免殘留?。
三、環(huán)境與儀器管理
溫育與顯色控制?
孵育溫度需穩(wěn)定在37℃,顯色時(shí)間嚴(yán)格按說明書控制,避光操作以減少非特異性顯色?。
儀器維護(hù)?
定期檢查洗板機(jī)管道是否堵塞,酶標(biāo)儀濾光片需清潔,避免負(fù)值干擾。高滴度樣本檢測后需清潔儀器?。
通過上述措施可有效降低ELISA實(shí)驗(yàn)中的樣本污染風(fēng)險(xiǎn),確保結(jié)果準(zhǔn)確性?。
注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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