產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

     骨組織堅(jiān)硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA難以分離，無法用傳統(tǒng)Trizol法進(jìn)行高質(zhì)量提取。本試劑盒采用的不含benf/氯仿配方的裂解液，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時(shí)基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶， 離心沉淀去除多糖和次級(jí)代謝產(chǎn)物，然后裂解混合物用乙醇調(diào)節(jié)RNA結(jié)合吸附到基因組DNA清除柱，然后RNA被選擇性洗脫濾過， 吸附在基因組DNA清除柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清除掉DNA。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后，RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.不使用有毒的benfei，氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

2.簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在35分鐘內(nèi)完成，世界上簡單快速的試劑盒。

3.研發(fā)成功基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。

4.適應(yīng)性廣泛，可以提取各種骨組織包括礦化骨組織。

5.多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9～2.2，基本無DNA殘留,可用于RT-PCR，Northern-blot，二代測(cè)序和各種實(shí)驗(yàn)。

運(yùn)輸和保存方法

1）本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。

2）不合適的儲(chǔ)存于低溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃－25℃）進(jìn)行。

3）避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

骨組織RNA快速提取試劑盒

注意事項(xiàng)

1.所有的離心步驟均可在室溫完成（4℃離心也可以），使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。

2.需要自備乙醇，研缽或者其它合適的破碎骨組織裝置。

3.樣品處理量不要超過基因組清除柱DA和和RNA吸附柱RA處理能力，否則造成DNA殘留或產(chǎn)量降低。開始摸索實(shí)驗(yàn)條件時(shí)，如果不清楚樣品DNA/RNA含量時(shí)可使用較少的樣品處理量， 將來根據(jù)樣品試驗(yàn)情況增加或者減少處理量。

4.裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時(shí)戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.關(guān)于DNA 的微量殘留:

一般說來任何總RNA提取試劑在提取過程中無法避免DNA的微量殘留（DNase消化也無法做到無殘留），本公司的RNA提取產(chǎn)品，由于采取了的緩沖體系和基因組DNA清除柱技術(shù)，絕大多數(shù)DNA已經(jīng)被清除，不需要DNase消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR和熒光定量PCR。個(gè)別特殊情況如DNA含量過于豐富造成殘留或者要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA表達(dá)量分析熒光定量PCR，我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí)：

1）選用跨內(nèi)含子的引物，以穿過mRNA中的連接區(qū)，這樣DNA就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。

2）選擇基因組DNA和cDNA上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對(duì)。

3）將RNA提取物用RNase-free的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I處理后的RNA清潔(cleanup) ，請(qǐng)聯(lián)系我們索取具體操作說明書。

4）在步驟去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上進(jìn)行DNase I柱上消化處理。購買DNA酶柱上消化試劑盒(貨號(hào)：RN34)前可先索取具體操作說明書。。

6. 本產(chǎn)品僅作科研用途！